6月27日，同济大学附属上海市肺科医院任胜祥、周彩存教授团队与复旦大学基础医学院李飞团队及恒瑞公司药物研发团队合作在《癌细胞》（Cancer Cell）上发表题为“Anti-tumor efficacy of HRS-4642 and its potential combination with proteasome inhibition in KRAS G12D-mutant cancer”的文章，提供了首个临床有效KRAS G12D特异性抑制剂——HRS-4642，及其与蛋白酶体抑制剂联合的治疗新策略。

KRAS G12D是实体瘤中最常见KRAS突变亚型，在胰腺癌（PDAC）和结直肠癌（CRC）中排第1，在肺腺癌（LUAD）中排第2。与KRAS G12C癌蛋白不同，KRAS G12D缺乏靠近switch-Ⅱ结合口袋的活性残基，使得开发共价抑制剂极具挑战性。目前，一些研究团队基于不同策略研发了数个KRAS G12D抑制剂。例如，非共价抑制剂MRTX1133可结合switch-Ⅱ口袋，抑制KRAS G12D核苷酸交换及下游效应分子结合，从而发挥抗肿瘤效果。其他抑制剂，如RMC-9805、TH-Z835及BI-2852等也处于研究当中。然而，这些药物仍处于临床前/初步临床研究阶段，临床上KRAS G12D仍缺乏有效靶向策略。

此外，KRAS抑制剂面临的另一重大挑战为不可避免的耐受。临床上，KRAS G12C抑制剂单药治疗客观有效率（ORR）为7.1%-53.4%，中位无进展生存期（PFS）为4.0-13.1个月，亟需联合治疗以增强疗效、增加获益人群。对此，Yaeger[17]和Hallin[4]等分别发现KRAS G12C和KRAS G12D抑制剂联合西妥昔单抗可增强疗效。这些研究充分说明寻找KRAS G12D抑制剂协同增敏靶标的重要性。 

在这项研究中，作者团队研发了一款高亲和力、选择性、长时效、非共价的KRAS G12D抑制剂，HRS-4642。体外，研究团队首先通过SPR实验确认HRS-4642特异性结合KRAS G12D，其亲和力为KRAS G12C的21倍，野生型KRAS蛋白的17倍。随后通过结合抑制实验，发现HRS-4642抑制KRAS G12D与SOS1或RAF1结合，发挥双重阻滞作用，进而抑制下游MEK-ERK信号通路。在16个人源细胞系中，HRS-4642特异性抑制KRAS G12D突变细胞系增殖（IC50值为0.55-66.58 nM之间），而对其他KRAS突变亚型或野生型细胞系作用极弱（IC50值为248.50到大于10,000 nM）。体内，通过构建AsPC-1、GP2d异种移植瘤模型及肺腺癌PDX模型，确认HRS-4642显著抑制KRAS G12D肿瘤生长，且具有较好的药代动力学（PK）、药效学（PD）特征，倾向于瘤内蓄积。在其I期临床研究（NCT05533463）中，HRS-4642也展示出临床活性。2名接受过多线标准抗肿瘤治疗的晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者，分别接受200mg和300mg HRS-4642（每周一次）治疗后，靶病灶分别缩小53%和31%，达部分缓解（PR）标准。这使得HRS-4642成为第一个被报道临床有效的KRAS G12D特异性抑制剂。

研究团队进一步通过体外全基因组CRISPR筛选，绘制了HRS-4642的增敏/耐受图谱。对筛选数据进行富集分析，确定蛋白酶体或可为HRS-4642增敏靶标。对TCGA数据进行分析也发现，蛋白酶体signature低表达与泛癌、肺腺癌及胰腺癌长生存相关。团队进而通过体内外联合给药实验，明确了HRS-4642联合蛋白酶体抑制剂卡非佐米在体外协同杀伤KRAS G12D突变细胞系，体内联合抑制KRAS G12D肿瘤生长。并通过RNA-seq、DIA蛋白质谱等手段，发现HRS-4642与卡非佐米联合治疗主要通过下调Notch4信号通路及上调IFNα信号通路发挥协同抗肿瘤作用。

除了提供HRS-4642靶向及其联合蛋白酶体抑制剂治疗新策略，研究团队通过流式细胞术、免疫组化等还发现，HRS-4642单药或联合卡非佐米可显著促进KRAS G12D肿瘤中CD3+、CD4+、CD8+ T细胞的浸润及激活，促进肿瘤免疫微环境（TIME）“炎化”，为KRAS G12D肿瘤靶免联合提供了理论基础。

同济大学附属上海市肺科医院博士后李重阳、罗丽波博士、贾科毅博士及上海恒瑞医药有限公司李心博士为本研究共同第一作者，上海恒瑞医药有限公司张喆博士和同济大学附属上海市肺科医院蒋涛副研究员为本研究共同通讯作者。

原文链接：https://doi.org/10.1016/j.ccell.2024.06.001